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http://cimav.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1004/138| Expresión diferencial de proteínas citoplasmáticas de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa en respuesta a nanopartículas de plata y de paladio | |
| JUAN GARDEA TORRES | |
| MARIA ANTONIA LUNA VELASCO HILDA AMELIA PINON CASTILLO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Los nanomateriales (NMs) tienen características únicas (ej. reactividad, área superficial alta,
etc.) comparadas con sus contrapartes de tamaños micrométricos o mayores. Esas
propiedades facilitan su interacción con células y organismos, incrementando sus efectos
tóxicos en células u organismos. Los efectos antimicrobianos de la plata (Ag) son bien
conocidos desde hace años y recientemente se ha evaluado el potencial antimicrobiano de
nanopartículas de Ag (NPs-Ag). Aunque se conoce sobre el efecto tóxico de las NPs, los
mecanismos de toxicidad no se han establecido claramente y estos pueden variar de un
sistema a otro. En este estudio se evaluó el efecto de inhibición de NPs-Ag y nanopartículas
de Pd (NPs-Pd) en bacterias de relevancia ambiental (Staphylococcus aureus y Pseudomonas
aeruginosa). Teniendo como meta principal evaluar los cambios de expresión de proteínas
citoplasmáticas de las bacterias, causados por su exposición a las nanopartículas.
Las NPs-Ag y NPs-Pd se sintetizaron por el método de reducción química y se
caracterizaron en cuanto a forma, tamaño, composición y cristalinidad, mediante análisis de
microscopía electrónica de barrido (SEM), difracción de rayos X y análisis elemental. La
inhibición de la actividad de bacterias expuestas a NPs-Ag y NPs Pd se midió mediante
ensayos de concentración mínima inhibitoria (CMI) con rezarsurina como indicador de
actividad celular. Donde se determinó la dosis letal 50 (DL50) a través de conteo celular en
placa. En ambos ensayos se utilizaron placas de 96 pozos con medio mínimo mineral
adicionado con diferentes concentraciones de cada NP (dispersas con pluronic). El análisis de
expresión de proteínas se realizó mediante electroforesis en gel en extractos de proteínas
citoplasmáticas de células expuestas a NPs (en concentración DL50 correspondiente).
Las NPs-Ag y NPs-Pd obtenidas presentaron forma esférica y tamaños entre 20-50 nm y 9-18
nm, respectivamente. La CMI en S. aureus correspondió a 129.7 y 337.4 ppm de NPs-Ag y
NPs-Pd, respectivamente. Mientas que P. aeruginosa tuvo una CMI de 9.2 ppm de NPs-Ag y
ésta no presentó inhibición en las concentraciones evaluadas de NPs-Pd. Los valores de DL50
obtenidos para S. aureus fueron de 103 y 195 ppm para las NPs de Ag y NPs-Pd,
respectivamente. En el caso de P. aeruginosa, solamente se obtuvo la DL50 para las NPs-Ag
(37 ppm). Con respecto al análisis de perfil de proteínas de S. aureus, se notó la expresión de una proteína con masa molar aproximada de 32.02 kDa cuando se expuso a NPs-Ag y la expresión de una proteína de mayor tamaño (~ 42.02 kDa) cuando ésta se expuso a NPs-Pd. Por otra parte, P. aeruginosa sólo mostró expresión de proteínas cuando se expuso a NPs-Ag, notándose una proteína de 112.82 y otra de 26.47 kDa de masa molar aproximadamente. De acuerdo al análisis de masas molares de proteínas listadas en diferentes bases de datos, las proteínas expresadas en S. aureus podrían ser serina hidroximetiltransferasa y fructosa bisfosfato–aldolasa y las expresadas en P. aeruginosa podrían ser parR y una proteína hipotética. Estos resultados indicaron que la bacteria gram positiva S. aureus, se inhibió por ambas NPs. Mientras que la bacteria gram negativa P. aeruginosa fue las más sensible a NPs-Ag y resistente a NPs-Pd. Igualmente, la expresión de proteínas solamente se notó cuando hubo inhibición del crecimiento de las bacterias. Finalmente, la diferenciación en expresión de proteínas señala que el mecanismo de toxicidad a nivel molecular varía con el tipo de célula y de nanopartícula. | |
| 2014-07 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| BIOQUÍMICA | |
| Aparece en las colecciones: | Maestría en Ciencia y Tecnología Ambiental |
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